外泌體（Exosomes）提取試劑盒-細(xì)胞培養(yǎng)上清4ml/T

產(chǎn)品概述product description

總外泌體(Exosomes) 提取試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng)上清用)適用于從各種原代或傳代培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)上清樣品中提取總外泌體。不需要超速離心,僅需通過(guò)簡(jiǎn)單的常規(guī)離心即可從樣本中獲取大量結(jié)構(gòu)完整的外泌體，具有快速簡(jiǎn)單，提取效率高的特點(diǎn)，可節(jié)省更多的實(shí)驗(yàn)時(shí)間和樣本。提取的外

泌體可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠糜诤罄m(xù)的多種實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用范圍廣 泛。外泌體是活細(xì)胞分泌的來(lái)源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體)的膜性小囊泡,直徑約為30-150nm, 天然存在于血液、唾液、尿液和母乳等各種體液中，研究發(fā)現(xiàn)，Exosome內(nèi)含有 與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)、mRNA和microRNA, 并且exosome能夠通

過(guò)生物屏障,在細(xì)胞間傳遞功能性核酸分子,從而發(fā)揮各種生物學(xué)功能。外泌體囊泡已經(jīng)成為細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)，參與原核生物和高等真核生物細(xì)胞之間的生物信號(hào)傳遞,以調(diào)節(jié)不同范圍的生物過(guò)程。外泌體囊泡的病理生理作用開(kāi)始在包括癌癥、感染性疾病和神經(jīng)變性疾病在內(nèi)的疾病中得到充分認(rèn)識(shí)，顯現(xiàn)了

外泌體作為疾病的早期診斷、治療干預(yù)的潛在新靶點(diǎn)的巨大應(yīng)用前景。此外, 未修飾和工程化的外泌體囊泡可能在大分子藥物遞送中具有應(yīng)用價(jià)值。傳統(tǒng)的體外培養(yǎng)的細(xì)胞中分離和提取exosome的主要方法是超速離心法，這種方法缺點(diǎn)是耗時(shí)耗力，往往需要30-70個(gè)小時(shí)， 每次最多只能處理6個(gè)樣品，需要大量的

起始材料，而且產(chǎn)量不高。生物自主開(kāi)發(fā)的外泌體快速提取試劑盒系列產(chǎn)品，可以通過(guò)簡(jiǎn)單離心快速高效獲得高純度外泌體顆粒。本試劑盒提取的外泌體完好無(wú)缺，能用于各種功能研究、蛋白分析及RNA分析、電鏡分析、NTA粒徑分析等下游實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。本試劑盒按每個(gè)樣本處理4ml細(xì)胞培養(yǎng).上清計(jì),每

個(gè)50T試劑盒大約可以用于提取200m|細(xì)胞培養(yǎng)上清。如果需要處理大量的細(xì)胞培養(yǎng)上清，將提取液按細(xì)胞培養(yǎng).上清體積的1: 4加入細(xì)胞培養(yǎng).上清即可。還可以提供- -小時(shí)快速提取獲得各種樣本外泌體的快速提取試劑盒(相關(guān)產(chǎn)品: BB-3903)。

保存溫度

2-8°C

注意事項(xiàng)

1.低溫有沉淀析出的話可以在37°C短時(shí)間水浴溶解，搖勻后使用。

2.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完!

有效期

檢測(cè)方法

外泌體研究

適用樣本

細(xì)胞培養(yǎng)上清

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便，無(wú)需超速離心，省時(shí)省力;

2.純度高，富集大,應(yīng)用范圍廣;

3.獲取的Exosome結(jié)構(gòu)和功能完整;

4.穩(wěn)定性好，便于運(yùn)輸，便于保存。

產(chǎn)品應(yīng)用

外泌體研究

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)

2.移液器

3.冰箱

4.冰盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管

2.吸頭

3.- -次性手套

使用注意事項(xiàng)

1.不同細(xì)胞分泌的外泌體數(shù)量差異極大,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況選擇培養(yǎng)基樣品的量,根據(jù)下游應(yīng)用和參考文獻(xiàn)確定。條件允許

的情況下采用盡可能多的細(xì)胞培養(yǎng)上清。

2.-般巨噬細(xì)胞、 淋巴細(xì)胞、造血細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞等分泌外泌體較多,其它細(xì)胞樣本建議每個(gè)樣培養(yǎng)基上清用量不少于

8 ml。常規(guī)的細(xì)胞樣本最佳培養(yǎng)上清上樣量為15-20 m|及以上,條件允許的情況下采用盡可能多的細(xì)胞培養(yǎng)上清。

3.條件允許的情況下可以將細(xì)胞培養(yǎng)上清濃縮后再提取外泌體。

使用方法

1.收集4ml待提取的培養(yǎng)基樣品，置2-8°C保存。

2.將樣品在4°C條件下，3000xg離心15分鐘。 棄沉淀，收集上清。

3.小心將上清移入另-干凈離心管中。

4.將樣品在4°C條件下，10000xg離心20分鐘。 棄沉淀，收集上清。

5.小心將上清移入另一干凈離心管中。

6.在4 ml.上清中加入1 ml提取液A,蓋緊離心管蓋，上下顛倒混勻1分鐘左右，使液體充分混勻。

7.置2-8C冰箱靜置過(guò)夜。

8. 在4°C條件下, 10000xg離心60分鐘。

9.小心移除上清,收集沉淀。

10.取50-100 u外泌體保存液將沉淀重懸,即得到外泌體樣品。

11.將外泌體樣本-80°C保存或直接用于下游應(yīng)用。

常見(jiàn)問(wèn)題分析

1.無(wú)外泌體血清培養(yǎng)基(或者無(wú)血清培養(yǎng)基)在什么時(shí)候使用?

細(xì)胞在正常含血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)-定的時(shí)間后, 細(xì)胞融合度約為60%-70%時(shí)，移去原有含血清的培養(yǎng)基,換成新鮮的

無(wú)外泌體血清培養(yǎng)基(或者無(wú)血清培養(yǎng)基)，繼續(xù)培養(yǎng)24-48 h,細(xì)胞融合度達(dá)到80%-95%左右時(shí)收取上清，該上清液即

可用于提取外泌體。