His標簽蛋白純化試劑盒

產(chǎn)品概述product description

標簽蛋白純化試劑盒提供全套試劑,適用于從各種樣品中純化帶有6*His標簽的

蛋白。本試劑盒填料支持物為CL 6B瓊脂糖凝膠,載量為20mg His標簽蛋白/ml填料。本試劑盒包含Ni-

Agarose填料、親和柱空柱以及可溶性His融合蛋白純化所需的全部試劑(細菌裂解液、蛋白酶抑制劑混

合物、結(jié)合緩沖液和洗脫緩沖液組分) ,使用方便。該鎳柱純化系統(tǒng)對6xHis- tag蛋白具有顯著特異吸附

能力，能夠高效-步純化帶有6個組氨酸親和標簽的蛋白。該系統(tǒng)具有4個Ni2+螯合位點,較只有3個螯合

位點的Ni-IDA結(jié)合Ni2+更為牢固,有效防止純化過程中Ni2 +脫落且增強對His標簽蛋白的結(jié)合能力,提

高純化效率。較高的基團密度,大大提高了蛋白載量。該系統(tǒng)在天然或變性條件下，對來源于各種表達系

統(tǒng)(如桿狀病毒,哺乳細胞，酵母以及細菌)中的His標簽蛋白,均有很好的純化效果。本產(chǎn)品已螯合鎳

離子，可直接用可溶性蛋白的純化,使用方便，快捷。使用pH為3-13的范圍內(nèi)都能有好的純化效果, pH2

和pH14的條件下也可以短期使用。填料可重復使用。

保存溫度

2-8C

注意事項

1.蛋白酶抑制劑-20°C保存;

2.其他2-8°C保存; 避免冷凍。

有效期

儀器準備

1.離心機

2.振蕩器

3.渦旋混勻器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

試劑準備

純

耗材準備

1.離心管

2.吸頭

3.-次性手套

使用注意事項

1.在純化之前采用電泳檢測蛋白的可溶性,本試劑盒只適合于可溶性蛋白的純化,如需純化包涵體蛋白，請選擇我公司的

其他貨號的包涵體蛋白純化試劑盒。

2.樣品中不能含有郁-巰基乙醇、DTT和EDTA、 EGTA等。

使用方法

用于純化可溶性蛋白

常見問題分析

1.His標簽蛋白純化過程,經(jīng)常出現(xiàn)的問題包括幾個方面:

純化的組分中沒有His標簽的蛋白?

His標簽 蛋白洗脫后雜帶較多?

我們可以根據(jù)檢測上柱前蛋白，流穿液蛋白，和洗脫液蛋白的檢測，來進行基本的判斷。是否包涵體蛋白?是否標簽沒有

表達出來:可能是因為折疊構(gòu)象不正確導致標簽在重折疊時沒有位于蛋白質(zhì)分子的表面上無法與離子柱結(jié)合:或者標簽在

折疊時沒有位于蛋白質(zhì)分子的表面上;蛋白不溶解或沉淀在柱子上:要留意緩沖液體的pH,此外在樣品中添加-些表面

活性劑甚至Z醇等有機溶劑可以增加疏水性蛋白的溶解度,對于帶半胱氨酸多的蛋白很容易氧化聚集沉淀,所以需要加2-

5mM巰基乙醇避免沉淀。