ELISA試劑盒測(cè)定步驟

用于夾心ELISA試劑盒

1. 確定用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)液，空白液和樣品的孔。為標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)備7孔，為空白樣品準(zhǔn)備1孔。將100μL標(biāo)準(zhǔn)品（閱讀《試劑制備》）的稀釋液，空白液和樣品各加入適當(dāng)?shù)目字小Ｓ闷桨宸饪跈C(jī)蓋上。在37?^o C下孵育2小時(shí)。
2. 從每個(gè)孔中除去液體，請(qǐng)勿清洗。
3. 向每個(gè)孔中添加100μL檢測(cè)試劑A工作溶液（即用型試劑盒中的檢測(cè)溶液A）。用平板封口器覆蓋后，在37?^o C下孵育1小時(shí)。
4. 吸出溶液并使用噴瓶，多通道移液器，歧管分配器或自動(dòng)清洗器在每個(gè)孔中用350μL的1×清洗溶液洗滌，靜置1?2分鐘。將平板輕拍到吸水紙上，從所有孔中完全清除殘留的液體。徹底清洗3次。最后一次洗滌后，通過(guò)抽吸或傾析除去所有剩余的洗滌緩沖液。翻轉(zhuǎn)板并將其吸在吸水紙上。
5. 向每個(gè)孔中添加100μL檢測(cè)試劑B工作溶液（即用型試劑盒中的檢測(cè)溶液B）。用平板封口器覆蓋后，在37?^o C下孵育1小時(shí)。
6. 重復(fù)吸取/沖洗過(guò)程，總共重復(fù)5次，如步驟4所述。
7. 向每個(gè)孔中添加90μL底物溶液。蓋上新的平板封口機(jī)。在37?^o C下孵育15-25分鐘（不要超過(guò)30分鐘）。避光。添加底物溶液后，液體將變成藍(lán)色。
8. 向每個(gè)孔中添加50μL終止溶液。加入Stop溶液后，液體將變?yōu)辄S色。通過(guò)敲擊板的側(cè)面來(lái)混合液體。如果顏色變化不均勻，請(qǐng)輕輕敲打板以確保充分混合。
9. 除去印版底部的所有水滴和指印，并確認(rèn)液體表面沒(méi)有氣泡。運(yùn)行酶標(biāo)儀，立即在450nm處進(jìn)行測(cè)量。

用于競(jìng)爭(zhēng)性ELISA試劑盒

1. 確定用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)液，空白液和樣品的孔。為標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)備7孔，為空白樣品準(zhǔn)備1孔。分別將50μL標(biāo)準(zhǔn)品（閱讀《試劑制備》），空白和樣品的稀釋液分別加到適當(dāng)?shù)目字?。然后立即向每個(gè)孔中添加50μL檢測(cè)試劑A（即用型試劑盒中的檢測(cè)溶液A）。輕輕搖動(dòng)平板（建議使用微孔板振蕩器）。用平板封口機(jī)蓋上。在37?^o C下孵育1小時(shí)。檢測(cè)試劑A可能看起來(lái)混濁。溫?zé)嶂潦覝兀p輕混合直至溶液均勻。?
2. 吸出溶液，并使用噴瓶，多通道移液器，歧管分配器或自動(dòng)清洗器用350μL1×清洗溶液清洗每個(gè)孔，并靜置1-2分鐘。將平板輕拍到吸水紙上，從所有孔中完全清除殘留的液體。徹底清洗3次。最后一次洗滌后，通過(guò)抽吸或傾析除去所有剩余的洗滌緩沖液。翻轉(zhuǎn)板并將其吸在吸水紙上。
3. 向每個(gè)孔中添加100μL檢測(cè)試劑B工作溶液（即用型試劑盒中的檢測(cè)溶液B）。用平板封口器覆蓋后，在37?^o C下孵育1小時(shí)。
4. 重復(fù)吸取/沖洗過(guò)程，總共5次，如步驟2所述。
5. 向每個(gè)孔中添加90μL底物溶液。蓋上新的平板封口機(jī)。在37?^o C下孵育15-25分鐘（不要超過(guò)30分鐘）。避光。加入底物溶液后，液體將變成藍(lán)色。
6. 向每個(gè)孔中添加50μL終止溶液。加入Stop溶液后，液體將變?yōu)辄S色。通過(guò)敲擊板的側(cè)面來(lái)混合液體。如果顏色變化不均勻，請(qǐng)輕輕敲打板以確保充分混合。
7. 除去印版底部的所有水滴和指印，并確認(rèn)液體表面沒(méi)有氣泡。運(yùn)行酶標(biāo)儀，立即在450nm處進(jìn)行測(cè)量。

注意：

1. 分析準(zhǔn)備：為每個(gè)實(shí)驗(yàn)保留適當(dāng)數(shù)量的孔，并從微孔板中移出多余的孔。對(duì)于傳統(tǒng)試劑盒，應(yīng)將剩余的孔重新密封并保存在-20?^o C，對(duì)于即用型試劑盒應(yīng)在4?^o C?儲(chǔ)存。 ?
2. 樣品或試劑的添加：僅使用新鮮制備的標(biāo)準(zhǔn)液。小心地將樣品添加到孔中并輕輕混合以避免起泡。不要觸摸井壁。對(duì)于該過(guò)程的每個(gè)步驟，將試劑或樣品添加到測(cè)定板上的總分配時(shí)間不應(yīng)超過(guò)10分鐘。這將確保每個(gè)移液步驟的耗時(shí)相等，而不會(huì)中斷。建議重復(fù)所有標(biāo)準(zhǔn)和樣品，盡管不是必需的。為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谔砑訕?biāo)準(zhǔn)品，樣品和試劑之間更換移液器吸頭。另外，每種試劑都應(yīng)使用分開(kāi)的容器。
3. 孵育：為確保準(zhǔn)確的結(jié)果，在孵育步驟中必須適當(dāng)密封平板密封劑。在孵育步驟之間，請(qǐng)勿讓孔長(zhǎng)時(shí)間暴露于裸露狀態(tài)。一旦將試劑添加到孔板中，在測(cè)試過(guò)程中任何時(shí)候都不要讓其干燥。孵育時(shí)間和溫度必須控制。
4. 洗滌：洗滌程序很關(guān)鍵。在每個(gè)步驟中徹底清除液體對(duì)于套件的良好性能至關(guān)重要。最后一次洗滌后，通過(guò)抽吸或傾析除去所有殘留的洗滌液，并除去板底上的水滴或指印。洗滌不充分將導(dǎo)致精度下降和吸光度讀數(shù)錯(cuò)誤。
5. 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入TMB底物后觀察顏色變化（例如，每10分鐘觀察一次），如果顏色太深，請(qǐng)?zhí)崆疤砑覵top Solution以避免過(guò)度強(qiáng)烈的反應(yīng)，這會(huì)導(dǎo)致吸光度讀數(shù)不準(zhǔn)確。
6. TMB基材? 很容易被污染。保護(hù)它免受光以及物理污染物的侵害。?
7. 環(huán)境濕度可能會(huì)影響從試劑盒獲得的結(jié)果。如果您所在設(shè)施的濕度小于60％，則建議使用加濕器。